Die Nationalgalerie Umbriens mit einer Sammlung von Meisterwerken von internationalem Interesse ist eine der reichsten in Mittelitalien. Ausgestellt sind überwiegend religiöse Gemälde, Skulpturen, Keramiken, Textilien und Schmuckstücke, Zeugnisse der italienischen Kunsttradition, die sich zwischen dem 13. und 19. Jahrhundert entwickelt hat. Zu den wichtigsten und bekanntesten Werken gehören die Skulpturen und Gemächer von:

• Arnolfo di Cambio (Der Schreiber)
• Duccio di Buoninsegna (Madonna mit Kind)
• Gentile da Fabriano (Madonna mit Kind und Engeln)
• des Seligen Angelico (Polyptychon Guidalotti)
• des Perugino (die Anbetung der hl. drei Könige, der tote Christus, die Madonna der Bruderschaft der Konsolation, der Polyptychon des hl. Augustus und eine Pietà)

Viele Werke sind ausserdem vom bekannten Künstler Pinturicchio geschaffen, darunter das Altarbild der hl. Maria dei Fossi. Von Piero della Francesca stammt der Polyptychon des hl. Anton. Zudem sind Benedetto Bonfigli, der die Kapelle der Prioren mit Werken schmückte, die sich an den Geschichten des hl. Ercolano und des hl. Ludwig von Tolosa inspirierten, Bartolomeo Caporali (Madonna mit Kind und Engeln) und Francesco di Giorgio Martini mit einer Geißelungsszene vertreten. In der Pinakothek gibt es verschiedene thematische Sektionen, Dokumentensammlungen über Perugia, topographische Karten und kostbare, aus den Museen in Perugia und den Kirchen stammende Gegenstände.