La pinacothèque Ambrosienne, avec une bibliothèque riche en précieux manuscrits, a son siège dans un palais austère construit par le cardinal Borromée en 1609. Elle abrite des tableaux, des sculptures et des objets surtout d'école lombarde et vénitienne du XVe au XVIIIe siècle et une collection de dessins. La Pinacothèque Ambrosienne, une des plus riche de Milan et d’Europe, où l’on conserve plusieurs chefs-d’oeuvre de l’art italien contient oeuvres de Caravage, Botticelli ("Madonna col Bambino"), Raphaël et deux tableaux de Léonard, le Musico et un portrait de Nobildonna con filo di perle. La bibliothèque de la pinacothèque abrite également le Codex Atlantico, le fameux recueil de notes composé par Léonard lui-même.